免疫(共)沉淀與質(zhì)譜聯(lián)用即常說(shuō)的Co-IP-MS / IP-MS(Co-Immunoprecipitation Mass Spectrum,Immunoprecipitation Mass Spectrum),是發(fā)現研究蛋白互作蛋白的一種重要利器。免疫共沉淀或免疫沉淀(Co-IP-MS / IP-MS)是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 細胞在非變性條件下被裂解時(shí),細胞內存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。用特異性抗體或其他親和試劑與靶標蛋白的親和作用,通過(guò)免疫共沉淀將靶標蛋白與靶標蛋白的相互作用蛋白從復雜的樣本中提取出來(lái),進(jìn)而進(jìn)行質(zhì)譜檢測以鑒定靶標蛋白的相互作用蛋白。
以檢測細胞內與FGF1蛋白相互作用的分子為例:
質(zhì)譜鑒定實(shí)驗流程(膠內酶解或溶液內酶解)
1:膠內酶解
2:溶液內酶解
使用儀器
Thermo Scientific Q Exactive (高分辨質(zhì)譜)
技術(shù)優(yōu)勢
適合中度復雜的蛋白質(zhì)樣品, 如相互作用的蛋白質(zhì)條帶和洗脫液; 高準確性, 高靈敏度。
實(shí)驗報告內容
1、相互作用蛋白質(zhì)譜定性鑒定結果,定量分析;
2、完整的實(shí)驗步驟、使用儀器、試劑來(lái)源、軟件檢索參數等。
蛋白樣品送樣要求
樣品 | 樣品要求 |
SDS-PAGE條帶 | 考染,條帶清晰可見(jiàn) |
蛋白質(zhì)溶液 | 蛋白質(zhì)總量>5μg,濃度>0.1μg/μl; 說(shuō)明裂解液和洗脫液成分,濃度信息 |
實(shí)驗樣本預處理及運輸注意事項
為保證高質(zhì)量的技術(shù)服務(wù)結果,請您參照以下說(shuō)明對實(shí)驗樣本進(jìn)行處理和保存:
⊙蛋白洗脫液:定量并計算總蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包裝寄送。
⊙蛋白質(zhì)條帶(考染):從凝膠上割取條帶時(shí),避免污染,將條帶放入EP管內,密封好管口,冰袋包裝寄送。
特別提醒:快遞寄送樣本運輸過(guò)程中,可能晃動(dòng)幅度會(huì )比較大,請做好基本運輸防護措施。
注:在寄送樣本時(shí),請填寫(xiě)好樣本登記表,隨樣本一同寄往本公司。
IP-MS聯(lián)用成功案例結果展示:
參考文獻:
Chen, Y., Jiang, T., Zhang, H. et al. LRRC31 inhibits DNA repair and sensitizes breast cancer brain metastasis to radiation therapy. Nat Cell Biol , 22, 1276–1285 (2020). https://doi.org/10.1038/s41556-020-00586-6